Mutacje RAS w raku płaskonabłonkowym u pacjentów leczonych inhibitorami BRAF AD 3

Niższy obraz w Panelu A jest widokiem małej mocy odcinka zmiany uzyskanej ze skóry tułowia tego samego pacjenta bez mutacji RAS, opisywanej jako rak płaskonabłonkowy podtypu keratoakantomy (hematoksylina i eozyna). Panel B pokazuje wygląd kliniczny (obraz górny) i wygląd histopatologiczny (obraz dolny, hematoksylina i eozyna) z rogowiaka kolczystokomórkowego z podbródka pacjenta z HRAS Q61R w serii walidacyjnej. W ramach przeglądu dermatopatologicznego pacjentów leczonych wemurafenibem przeanalizowano 21 próbek skóry płaskonabłonkowego raka płaskonabłonkowego lub rogowiaka kolczystokomórkowego uzyskanych od 11 pacjentów z przerzutowym czerniakiem (tabela 3A w dodatkowym dodatku). Zestaw do weryfikacji 14 próbek od 12 pacjentów leczonych wemurafenibem był następnie analizowany w celu potwierdzenia wysokiej częstotliwości mutacji RAS (Tabela 3B w Dodatku Uzupełniającym). Ogólnie średni czas do rozpoznania pierwszego raka skóry płaskonabłonkowej lub rogowiaka kolczystokomórkowego w połączonych seriach wynosił 10 tygodni, a najwcześniejsza zmiana pojawiła się po 3 tygodniach (Tabela 4 w dodatkowym dodatku). Średni wiek rozpoznania wynosił 60 lat (zakres od 44 do 84). U osiemnastu spośród 23 pacjentów (78%) występowała w wywiadzie i klinicznych objawów przewlekłej, słonecznej skóry, a 4 (17%) miało w przeszłości raka skóry płaskonabłonkowej lub rogowiaka kolczystokomórkowego. Zmiany były szeroko rozpowszechnione, z 34% na obszarach głowy i szyi, 23% na tułowiu i 43% na kończynach. Dwadzieścia dwie zmiany (63%) scharakteryzowano jako rogowiaka kolczystokomórkowego (ryc. i ryc. w dodatkowym dodatku), a 13 (37%) stanowiły raki płaskonabłonkowe skóry.
Mutacje genów i aktywacja ERK w próbkach uszkodzeń
W początkowej kohorcie 21 analizowanych centralnie próbek wystąpiło 14 mutacji w kodonach hotspot (12, 13 i 61) różnych genów RAS (HRAS, NRAS lub KRAS) w 13 próbkach (62%, 95% przedział ufności [CI ], 38 do 82) (ryc. 1C i 1D oraz tabela 3A w dodatkowym dodatku). Najbardziej rozpowszechnione substytucje HRAS wystąpiły w kodonie 61 (8 z 14), z mniejszą liczbą w kodonie 12 (4 z 14) i kodonie 13 (2 z 14). Dwie z 18 próbek miały mutacje TP53, które zmieniają aminokwasy w białku p53 (tabela 3A w dodatkowym dodatku). Jedna próbka miała mutację intronową w TP53, a dla 3 próbek (wszystkie z Pacjenta 4), nie uzyskano żadnych wyników. Nie zidentyfikowano mutacji w eksonie 2 CDKN2A. Fosforylację ERK oceniano w 10 raków skóry płaskonabłonkowej lub rogowiaka kolczystokomórkowego i otaczających prawidłowych nabłonkach i stwierdzono, że są one wyższe w tych zmianach niż w prawidłowym naskórku (ryc. 2A i 2B w dodatkowym dodatku).
Ryc. 2. Ryc. 2. Przykłady mutacji i analizy sygnałowej MAPK w raku płaskonabłonkowym lub nerwiakowatym. Barwienie immunohistochemiczne dla pERK (brązowy) próbek normalnej sąsiedniej skóry (po lewej) i skórnych raków płaskonabłonkowych (po prawej) przedstawiono u dwóch pacjentów z grupy walidacyjnej leczonych wemurafenibem. U tych pacjentów, u których wykryto mutacje GRA G12, zmiany rozpoznawano jako dobrze zróżnicowane raki płaskonabłonkowe, które pojawiły się po 87 dniach (panel A) i 51 dniach (panel B) po rozpoczęciu leczenia wemurafenibem.
W zestawie walidacyjnym mutacje RAS odnotowano w 8 z 14 próbek (57%, 95% CI, 29 do 82): 4 w HRAS i 4 w KRAS (Tabela 3B w dodatkowym dodatku). W 4 próbkach z dostateczną otaczającą normalną skórą do wykonania analiz mutacyjnych RAS nie wykryto mutacji (Tabela 3B i Figura 2C i 2D w Dodatku Uzupełniającym). Barwienie dla pERK, które przeprowadzono w 3 z 4 próbek, było bardziej rozległe w komórkach zmian niż w otaczającej normalnej skórze (Figura 2). Tak więc mutacje RAS odnotowano w 60% połączonych serii, a HRAS Q61L był najczęstszą mutacją, więc onkogenny HRAS został wybrany do przedklinicznych badań mechanistycznych.
Wpływ Inhibitorów BRAF na komórki hamujące mutacje HRAS
Paradoksalny wzrost sygnalizacji MAPK i proliferacji komórek blokujących zmutowany HRAS
Rysunek 3. Rycina 3. Badania mechanistyczne ukazujące paradoksalną aktywację MAPK w liniach komórkowych. Panel A pokazuje stymulację wzrostu komórek B9 w miękkim agarze po ekspozycji na wemurafenib lub PLX4720. Panel B pokazuje różnicową ekspresję wybranych genów wyjściowych regulowanych przez MAPK w komórkach B9 po ekspozycji na wemurafenib lub PLX4720 przez noc, w porównaniu z ekspresją genu pięciu ludzkich linii komórek czerniaka stosowanych jako odniesienie.7 Kolor czerwony oznacza wyższą ekspresję, a kolor zielony wskazuje niższą ekspresję niż nietraktowane komórki. Panel C pokazuje wyniki analizy Western blot komórek NIH3T3 transfekowanych wektorem kontrolnym lub zmutowanym HRAS Q61L i leczonych różnymi stężeniami wemurafenibu.
Aby zbadać wpływ inhibitorów BRAF na mutacje HRAS w raku skóry płaskonabłonkowej, wykorzystano mysią linię komórkową B9, która zawiera HRAS Q
[patrz też: stomatolog poznań, dermatologa, stomatologia dziecięca ]
[hasła pokrewne: badania do celów sanitarno-epidemiologicznych, hipokrates gorzów, stomatolog warszawa centrum ]